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配制台式KB88凯时客户端密度梯度溶液的方法

發布時間:2017-07-03      點擊次數:2589

  前两天小编给大家讲解了台式KB88凯时客户端密度梯度離心法和梯度介質的回收,爲了讓大家對此問題認識更全面,今天給大家科普下密度梯度溶液的配制方法。配置密度梯度溶液,一般情況下是先配制高濃度儲備液,再用緩沖液稀釋到需要的濃度,階梯梯度配制若幹個不同密度的溶液,連續梯度一般配制兩種密度的溶液,其中一種是梯度的大密度,另一種是梯度的小密度。

  用各种离心机转子在梯度介质中分离颗粒时,使用两种形式的梯度,即自形成梯度和预形成梯度。自形成梯度是梯度介质在离心场作用下颗粒重新分布,形成从顶部到底部逐渐增加密度的液柱。预形成梯度是指在离心之前,用梯度形成仪或人工的方法预先制备密度梯度柱。按照梯度结构可分为不连续梯度(即阶梯度)和连续梯度两种类型。连续梯度又有线性梯度、指数梯度、对数梯度和复合梯度。有时为了速率区带离心分离的方便,又设计了等动力梯度,为了防止在区带转子中的径向稀释,设计了等体积梯度。配置密度梯度溶液需要注意很多事项。

  堿金屬鹽溶液在4℃下可以長期保存,但含碘的物質應避光保存,多元醇易受微生物汙染,保存在-20℃使用時不方便。好臨時配置。有些使用KB88凯时客户端進行離心需要在無菌條件下進行,但高壓消毒對有些梯度介質會帶來一些不利影響,如引起Percoll顆粒不穩定,配制時可只對稀釋劑進行消毒,碘化梯度介質中只有Metrizamide可以進行高壓消毒。溶解多糖是先給粉劑裏加入少許水攪拌,使之成爲半透明的糊狀,再稀釋到所需體積。如果直接把大量水或緩沖液加到多糖粉劑裏,會形成大量凝塊。可用比重瓶或折射儀測定梯度溶液的密度和所有介質的密度分布,用下述方程能快速地根據折射率計算溶液的密度:

ρ=An-B 
式中,A和B的值随着梯度介质和温度的变化而不同,如用0.8% NaCl、120mmol/L Tricine-NaOH配制的等渗Iodixanol梯度中,A=3.2984,B=3.3967。

儲存液與稀釋劑間通過混合得到的溶液密度可用下式計算:

图片1.png

式中,D爲所需密度;V爲儲存液的體積;d爲儲存液的密度;V1爲稀釋液的體積;d1爲稀釋液的密度。
  经过小编的讲解,大家是否清楚了蜀科
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